Használható -e PCR vagy QPCR kézi munkaállomás beágyazott PCR -hez?
A beágyazott PCR egy erőteljes technika a molekuláris biológiában, amely javítja a PCR -amplifikáció specifitását és érzékenységét. Ez magában foglalja a PCR -reakciók két fordulóját, a második fordulóban a szekvenciákhoz használt primereket az első fordulóban. PCR vagy QPCR kézi munkaállomások beszállítójaként gyakran megvizsgálom a munkaállomások beágyazott PCR -re való alkalmasságát. Ebben a blogbejegyzésben megvizsgálom, hogy a PCR vagy a QPCR kézi munkaállomás felhasználható -e beágyazott PCR -hez, és megvitatja -e a megfontolásokat és az előnyöket.
A beágyazott PCR megértése
A beágyazott PCR a standard PCR technika módosítása. Egy standard PCR -ben egyetlen primerpárot használunk egy specifikus DNS -fragmentum amplifikálására. A beágyazott PCR -ben azonban két primerkészletet használnak két egymást követő PCR -reakcióban. Az első primerkészlet egy nagyobb DNS -fragmentumot erősít, a második primerkészlet, amely az első amplikonon belül található, egy kisebb, specifikusabb fragmentumot erősít. Ez a két lépés folyamat szignifikánsan csökkenti a nem -specifikus amplifikációt, és növeli a cél DNS sikeres amplifikálásának esélyét, különösen akkor, ha a cél alacsony bőségben van, vagy ha magas a nem cél DNS háttere.
A PCR vagy a QPCR kézi munkaállomások jellemzői
A PCR vagy a QPCR kézi munkaállomások célja, hogy ellenőrzött környezetet biztosítsanak a PCR és QPCR reakciók végrehajtására. Ezeknek a munkaállomásoknak általában olyan tulajdonságai vannak, mint például a tiszta pad, amely megakadályozza a szennyeződést, állítható pipettázó állomások a pontos reagensek adagolásához és a PCR -kerékpározáshoz szükséges hőmérsékleten szabályozott blokk.
A kézi munkaállomás tiszta padja HEPA szűrőkkel van felszerelve, amelyek eltávolítják a levegőben lévő részecskéket és mikroorganizmusokat, ami elengedhetetlen a beágyazott PCR -hez, mivel a szennyeződés hamis - pozitív eredményekhez vezethet. Az állítható pipettázó állomások lehetővé teszik a kis mennyiségű reagensek pontos mérését és átadását, ami elengedhetetlen mind a beágyazott PCR első és második fordulójában. A hőmérséklet -szabályozott blokk pontosan szimulálja a PCR -hez szükséges különféle hőmérsékleti ciklusokat, beleértve a denaturációt, az izzítást és a meghosszabbítást.
PCR vagy QPCR kézi munkaállomás használata a beágyazott PCR -hez
Igen, a PCR vagy a QPCR kézi munkaállomás hatékonyan használható beágyazott PCR -hez. Így van:
1. Minta előkészítés
A kézi munkaállomás által biztosított tiszta környezet ideális a minta előkészítéséhez. Ha a beágyazott PCR -ben alacsony bőségű cél DNS -sel dolgozik, akkor minden szennyeződés megzavarhatja az eredményeket. A HEPA - szűrt tiszta pad biztosítja, hogy a minták védjenek a külső szennyező anyagoktól az első - kerek PCR reakció kivonása és kezdeti beállítása során.
Például, amikor a DNS -t egy klinikai mintából extrahálják, a munkaállomás tiszta környezete minimalizálja a környezeti DNS vagy más szennyező anyagok bevezetésének kockázatát. Az állítható pipettázó állomások lehetővé teszik a reagensek, például a DNS -extrakciós pufferek, az enzimek és az alapozók pontos hozzáadását, biztosítva, hogy az első - kerek PCR reakció helyesen van beállítva.
2. Első - kerek PCR
A kézi munkaállomás hőmérséklet -szabályozott blokkja pontosan végrehajthatja az első - kerek PCR -hez szükséges hőmérsékleti ciklusokat. A denaturációs lépés, általában 94–98 ° C -on, az izzítási lépés (a hőmérséklet a primer szekvenciáktól függ), és a hosszabbítási lépés 72 ° C -on pontosan szabályozható. Ez a pontos hőmérséklet -szabályozás elengedhetetlen a nagyobb DNS -fragmentum megfelelő amplifikációjához az első - kerek PCR -ben.
A pipettázó állomások szintén létfontosságú szerepet játszanak a megfelelő mennyiségű sablon DNS, primerek, dNTP -k és polimeráz hozzáadásában a reakcióelegyhez. A pontos pipettázás biztosítja, hogy a reakcióviszonyok optimálisak legyenek az első kerek amplifikációhoz.
3. második - kerek PCR
Az első - kerek PCR után a terméket a második - kerek PCR sablonjaként használják. A kézi munkaállomás lehetővé teszi az első kerek termék gondos kezelését a szennyeződés elkerülése érdekében. A pipettázó állomások pontosan átvihetik az első - kerek termék kis mennyiségét a második kerek reakcióelegybe.
A hőmérséklet - szabályozott blokk ismét biztosítja a szükséges hőmérsékleti ciklusokat a második - kerek PCR -hez. Mivel a második kerek primer az első - kerek amplikonon belül van beágyazva, a lágyítási hőmérséklet eltérő lehet, és a kézi munkaállomás ennek megfelelően beállítható, hogy biztosítsa a kisebb, specifikusabb DNS -fragmentum specifikus amplifikációját.
A beágyazott PCR -hez kézi munkaállomás használatának előnyei
1. Költség - Hatékony
A teljesen automatizált munkaállomásokhoz képest a PCR vagy a QPCR kézi munkaállomások általában költségek - hatékonyabbak. A korlátozott költségvetéssel rendelkező laboratóriumok esetében, vagy azoknál, amelyek nem igényelnek magas, átfedött beágyazott PCR -t, a kézi munkaállomás gyakorlati megoldást kínál. Ez lehetővé teszi a magas színvonalú, beágyazott PCR -t anélkül, hogy nagy beruházásra lenne szükség a drága automatizált berendezésekbe.
2. Rugalmasság
A kézi munkaállomások nagyobb rugalmasságot kínálnak. A felhasználó teljes mértékben ellenőrzi a pipettázási folyamatot, lehetővé téve a beágyazáshoz a beágyazott PCR protokoll konkrét követelményeinek alapján. Például, ha egy adott mintának eltérő primer -koncentrációra vagy módosított hőmérsékleti profilra van szükség, a felhasználó könnyen elvégezheti ezeket a változtatásokat a reakció beállítása során.
3. Képzés és megismerés
Számos laboratóriumi technikus már ismeri a kézi pipettázási technikákat. A beágyazott PCR kézi munkaállomás használata nem igényel kiterjedt képzést a komplex automatizált rendszereken. Ez a megismerés a beágyazott PCR protokoll hatékonyabb és pontosabb végrehajtásához vezethet.
Megfontolások
Míg PCR vagy QPCR kézi munkaállomás használható beágyazott PCR -hez, vannak néhány szempont:
1. Üzemeltetői készség
A beágyazott PCR pontossága kézi munkaállomással nagymértékben függ a kezelő készségétől. A minták pontos pipettázása és gondos kezelése döntő jelentőségű. A nem megfelelő pipettázási készségek pontatlan reagensekhez vezethetnek, ami befolyásolhatja a beágyazott PCR amplifikációs hatékonyságát és specifitását.
2. Átadási sebesség
A kézi munkaállomások alacsonyabb teljesítményűek az automatizált rendszerekhez képest. Ha a laboratóriumnak nagyszámú beágyazott PCR -reakciót kell végrehajtania, akkor a kézi munkaállomás nem lehet a leghatékonyabb lehetőség.
Egyéb kapcsolódó kézi munkaállomások
A PCR vagy a QPCR kézi munkaállomásokon kívül más típusú kézi munkaállomásokat is kínálunk, amelyek érdeklődhetnek. ACellalízis -kézikönyv munkaállomássejt alapú vizsgálatokhoz tervezték, és beágyazott PCR -vel együtt használhatók, amikor a sejtekben gén expressziót tanulmányoznak. APRCXI pipettázó munkaállomásfejlett pipettázási képességeket biztosít, és értékes kiegészítés lehet a beágyazott PCR -t végző laboratóriumban. AELISA kézi munkaállomásfelhasználható a beágyazott PCR -termékek downstream elemzésére, például a specifikus DNS -szekvenciák jelenlétének kimutatására ELISA -alapú módszerekkel.
Következtetés
Összegezve, a PCR vagy a QPCR kézi munkaállomás hatékonyan használható beágyazott PCR -hez. Tiszta környezete, pontos pipettázási képességei és pontos hőmérséklet -szabályozása alkalmassá teszi a beágyazott PCR -folyamat minden szakaszára, a minta előkészítésétől a második kerek amplifikációig. A költség -hatékonyság, a rugalmasság és a kézi munkaállomások könnyű használata jelentős előnyök, különösen a kisebb laboratóriumok vagy a konkrét kutatási igényekkel rendelkező személyek számára.
Ha érdekli, hogy többet megtudjon a PCR vagy a QPCR kézi munkaállomásokról, vagy kérdései vannak a beágyazott PCR -hez való felhasználásról, arra ösztönözzük, hogy vegye fel velünk a kapcsolatot egy részletes megbeszélés és potenciális beszerzés céljából. Szakértői csapatunk készen áll arra, hogy segítsen Önnek a laboratóriumi igényekhez való legjobb megoldás megtalálásában.
Referenciák
- Dieffenbach, CW és Dveksler, GS (1995). PCR alapozó: laboratóriumi kézikönyv. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Innis, MA, Gelfand, DH, Sninsky, JJ és White, TJ (1990). PCR protokollok: Útmutató a módszerekhez és alkalmazásokhoz. Academic Press.
- Saiki, RK, Gelfand, DH, Stoffel, S., Scharf, SJ, Higuchi, R., Horn, GT, Mullis, KB és Erlich, HA (1988). A DNS primer - irányított enzimatikus amplifikációja termosztálható DNS -polimerázzal. Science, 239 (4839), 487 - 491.